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非特---条带

1. 原因:一抗有非特---与蛋白结合;

2. 优化:更换一抗或参考“高背景”;

3. 解析:此种情况多数是因一抗不好,换一支抗体;设置好对照组区分目的条带;还有可能是一抗浓度过高引起的非特---结合。


条带有边缘规则的白圈

1. 原因:转膜时膜和胶之间存在气泡;

2. 优化:转膜前去掉膜和胶之间的气泡;

3. 解析:赶气泡太容易,省略。






条带中间出现白斑点

1. 原因:底物消耗过快,中间区底物消耗完不发光了;

2. 优化:降低蛋白量,orb98668,降低一抗和二抗的浓度;

3. 解析:快速操作,在中间部位底物消耗之前就把胶光片定影出来,一般实验员很难把控制;首0选从降低蛋白量,降低一抗二抗浓度入手。



出现黑点

1. 原因:膜上其他部位与一抗或者二抗非特---结合;

2. 优化:封闭用的牛奶一定要纯并且完全溶解,封闭后至少洗膜一次;

3. 解析:确定封闭牛奶完全溶解,否则封闭时会导致不溶性颗粒附着在膜上,在发光时膜上会出现黑点;建议在牛奶溶解之后静止三分钟,轻取上层牛奶液进行封闭,封闭结束常规洗膜一次;孵育一抗或二抗时,需要加牛奶的也请参照此操作。







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