beta actin抗体-英国biorbyt办事处

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    2022-6-18

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条带中间出现白斑点

1. 原因:底物消耗过快,中间区底物消耗完不发光了;

2. 优化:降低蛋白量,降低一抗和二抗的浓度;

3. 解析:快速操作,在中间部位底物消耗之前就把胶光片定影出来,一般实验员很难把控制;首0选从降低蛋白量,降低一抗二抗浓度入手。



出现黑点

1. 原因:膜上其他部位与一抗或者二抗非特---结合;

2. 优化:封闭用的牛奶一定要纯并且完全溶解,封闭后至少洗膜一次;

3. 解析:确定封闭牛奶完全溶解,否则封闭时会导致不溶性颗粒附着在膜上,在发光时膜上会出现黑点;建议在牛奶溶解之后静止三分钟,轻取上层牛奶液进行封闭,封闭结束常规洗膜一次;孵育一抗或二抗时,beta actin抗体,需要加牛奶的也请参照此操作。







条带拖尾

1. 原因:蛋白量太大,一抗浓度偏高和孵育时间太长;

2. 优化:根据实验需求调整上样蛋白量,调整一抗浓度和时间;

3. 解析:这种情况也是常见问题,上样蛋白量一般会做预实验避免;还有容易发生的是一抗浓度太高,作用时间太长引起的,品牌一抗都有稀释比例建议;再个---的一抗直接37度孵育半小时就好,无需孵育过夜;再强调一遍洗膜千万不要偷懒,次数和时间洗---,不要---把抗体和蛋白洗掉没那么脆弱。





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