条带中间出现白斑点
1. 原因:底物消耗过快,中间区底物消耗完不发光了;
2. 优化:降低蛋白量,隐球菌抗体,降低一抗和二抗的浓度;
3. 解析:快速操作,在中间部位底物消耗之前就把胶光片定影出来,一般实验员很难把控制;首0选从降低蛋白量,降低一抗二抗浓度入手。
出现黑点
1. 原因:膜上其他部位与一抗或者二抗非特---结合;
2. 优化:封闭用的牛奶一定要纯并且完全溶解,封闭后至少洗膜一次;
3. 解析:确定封闭牛奶完全溶解,否则封闭时会导致不溶性颗粒附着在膜上,在发光时膜上会出现黑点;建议在牛奶溶解之后静止三分钟,轻取上层牛奶液进行封闭,封闭结束常规洗膜一次;孵育一抗或二抗时,需要加牛奶的也请参照此操作。
条带变形或奇型
1. 原因:配置胶有问题,胶中存在气泡或者某不溶性颗粒,电泳电流不均一;
2. 优化:配胶过程中要小心,使用无杂质的液体。
3. 解析:多数实验室使用设备都有些年限,比如配胶用的海绵垫或塑胶条等,用久了不密封出现漏液漏气;各buffer要注意不要有杂质;不使用边缘效应孔上样。
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